探討秀麗隱桿線蟲中 IFE-1 經由 sRNA 路徑對於精子生成機制的影響

陳品安、吳念穎

摘要

當真核轉譯起始因子 IFE-1 有缺陷或缺少 26G sRNA，皆將使精子具有缺陷而不孕。另一方面，已知 NYN-3 可裁切目標基因的 mRNA 進而促進 ALG-3/4 26G sRNA 的生成，而 ALG-3/4 26G sRNA 疑似可正向調控 msd-1 mRNA 促進其基因表現。在本實驗中我們將驗證 IFE-1 是否參與協助酵素 NYN-3 切割 msd-1 mRNA 進而促進 ALG-3/4 26G sRNA 的生成並影響精子形成。

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研究目的

1. 交配線蟲以得到 ife-1:2xflag ; msd-1:gfp 及 ife-1(tm 4249) ; msd-1:gfp
2. 西方墨點法確認 15、20、25 度下公蟲及雌雄同體 IFE-1 存在及位置
3. 螢光顯微鏡觀察不同溫度 ife-1:2xflag ; msd-1:gfp 精子 GFP 表現量
4. 觀察 ife-1 突變及 ife-1 正常 GFP/ Mcherry 在精子中表現量比值差異
5. （五） 西方墨點法確認免疫沈澱複合物為 2xFLAG::IFE-1
6. RT-qPCR 確認免疫沈澱複合物 2xFLAG::IFE-1 含有 msd-1 mRNA

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研究過程與方法

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研究成果與展望

我們證明了 ife-1:2xflag ; msd-1:gfp 基因型線蟲存在。在不同的性別顯微螢光拍攝中，得知 msd-1:gfp 對於精子的影響較為顯著。不同溫度下 GFP 在公蟲精子表現並無顯著差異，可知在 ife-1 無缺陷的情況下，26G sRNA 可正常作用使 MSD-1::GFP 表現。未來我們將設計實驗進一步了解 26G sRNA 如何正向調控 msd-1 mRNA，有望以線蟲作為模式生物，發展成有別於過往 siRNA 藥物抑制基因表現的一種新基因治療方法。

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